培養(yǎng)基的主要成分有氮源、碳源、無(wú)機(jī)鹽、水分及一些生長(zhǎng)因子,它們主要為細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖提供營(yíng)養(yǎng)和生長(zhǎng)環(huán)境。
水:水是良好的溶劑,細(xì)菌所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)必須先溶于水,營(yíng)養(yǎng)的吸收與代謝均需有水才能進(jìn)行。制備培養(yǎng)基常用不含雜質(zhì)的蒸餾水或離子交換水。
氮源:氮源主要用于構(gòu)成菌體細(xì)胞物質(zhì)(氨基酸、蛋白質(zhì)、核酸等)和含氮代謝物。常用的氮源可分為兩大類:有機(jī)氮源和無(wú)機(jī)氮源。
碳源:碳源是組成培養(yǎng)基的主要成分之一。常用的碳源有糖類、油脂、有機(jī)酸和低碳醇。在特殊情況下(如碳源貧乏時(shí)),蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物或氨基酸等也可被某些菌種作為碳源使用。
無(wú)機(jī)鹽:無(wú)機(jī)鹽是細(xì)胞維持生命活動(dòng)所的營(yíng)養(yǎng)成分,主要有Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Cl-、PO43-、SO42-、HCO3-等,主要作用為維持細(xì)胞培養(yǎng)液滲透壓平衡,參與細(xì)胞的代謝活動(dòng)。此外,通過(guò)提供鈉,K+和Ca2+,幫助細(xì)胞調(diào)節(jié)細(xì)胞膜功能。
注意事項(xiàng):
培養(yǎng)基在使用前通過(guò)高壓或過(guò)濾滅菌。防止污染應(yīng)該注意以下事項(xiàng):
確認(rèn)工作細(xì)胞庫(kù)是否被污染,確認(rèn)毒種工作種子批是否被污染,確認(rèn)所用培養(yǎng)基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染,均可用細(xì)菌、真菌及支原體無(wú)菌試驗(yàn)來(lái)確認(rèn)并排除。
同時(shí)要對(duì)無(wú)菌試驗(yàn)培養(yǎng)基的靈敏度進(jìn)行驗(yàn)證。實(shí)際生產(chǎn)中,可以從配制好的培養(yǎng)液中取少量加入營(yíng)養(yǎng)瓊脂于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),48小時(shí)即可觀察有無(wú)污染。